ερωτήσεις :DNA εισάγεται σε έναν ξενιστή, χρησιμοποιώντας ένα πλασμίδιο πώς;
Επισκέπτης (49.149.*.*)[Φιλιππίνων ] Κατηγορία :[Τεχνολογία][Άλλος]
Πρέπει να απαντήσω [Επισκέπτης (18.218.*.*) | Σύνδεση ]
Όλα απαντήσεις [ 1 ]
[Μέλος (黑面书生)]απαντήσεις [Κινέζικα ]
Χρόνος :2016-02-23
τεχνικές μοριακής κλωνοποίησης (παρασκευή του πλασμιδίου DNA και τοποθετήστε θραύσματα του DNA, ανασυνδυασμένο πλασμίδιο αντιδράσεις μετασχηματισμού και συνδέσεις) Κλωνοποίηση ορίζεται από ένα μόριο πρόγονος αντιγραφή το παραγόμενο και προγονικό μόριο πανομοιότυπα ομάδα μορίων λαμβάνει χώρα στο γενετικό επίπεδο ονομάζεται Κλωνοποίηση μοριακή κλωνοποίηση (DNA κλώνος). Παρασκευή του (α) DNA πλασμιδίου (Β) ένθετο ϋΝΑ της Παρασκευής 1, η αντίστροφη αντίδραση μεταγραφής 2, DNA αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (PCR) (III) αντίδραση απολίνωσης (Iv) το ανασυνδυασμένο πλασμίδιο μετασχηματισμός
Παρασκευή του πλασμιδιακού DNA Το πλασμίδιο είναι παρόν στο βακτηριακό χρωμόσωμα έξω από το κλειστό βρόχο μορίων δίκλωνου DNA επιδέχονται ανεξάρτητο αναδιπλασιασμό, μπορεί να δώσει το βακτηριακό (κύτταρο ξενιστή) ειδικών φαινοτύπων. Το πλασμίδιο δεν είναι απαραίτητη για την ανάπτυξη των βακτηρίων, αλλά λόγω της της κωδικοποίησης μερικά από τα ευεργετικά βακτήρια τα ένζυμα του ξενιστή, έτσι ώστε το βακτήριο ξενιστή έχει την ικανότητα να ανθίσταται δυσμενείς παράγοντες όπως η αύξηση των ιδίων αντοχής του και τα παρόμοια. Τώρα βρέθηκε κυρίως χωρίζεται σε πλασμιδιακό φορέα F (πλασμίδιο), R πλασμίδια (πλασμίδια αντίστασης), E.coli πλασμίδιο (εντεροτοξικογόνου πλασμίδιο E. coli). Ανάλογα με τον αριθμό των αντιγράφων των πλασμιδίων σε ένα κυτταρικό κύκλο μπορεί να διαιρεθεί σε ένα πλασμίδιο αυστηρότητας (χαμηλού αριθμού αντιγράφων, αντιγραφή μία φορά ή δύο φορές) και χαλάρωση (υψηλή αντίγραφο, αντίγραφο 10-200 φορές). Από βακτηριακό πλασμίδιο ασυμβατότητας με τη διασπασμένη μετά αφήνοντας ένα υψηλού αριθμού αντιγράφων πλασμίδια, όπως πλασμίδια τα R1 και R2 με δύο είδη αντίσταση ανήκει σε μια κατηγορία, καθώς ασυμβατότητα ότι δεν μπορούν να συνυπάρχουν στο ίδιο βακτήρια, αλλά διαφορετικές ομάδες πλασμιδίων μπορούν να συνυπάρξουν σε ένα βακτήρια. Το πλασμίδιο που υπάρχει στο βακτήριο, έτσι ώστε η παρασκευή του πλασμιδίου DNA, πλασμίδιο που περιέχει βακτήρια πρέπει πρώτα αναπτύχθηκε σε λογαριθμική φάση, έτσι ώστε το πλασμίδιο ενισχύεται σε βακτήρια σε ένα υγρό μέσο που περιέχει το κατάλληλο αντιβιοτικό. Τα βακτήρια συλλέχθηκαν με φυγοκέντρηση, τα βακτήρια με αλκαλική λύση, το πλασμίδιο και βακτηριακές χρωμοσωμικό DNA μετουσιώθηκε, και στη συνέχεια προσθέστε το διάλυμα, το διάλυμα επανήλθε σε ουδέτερο pH, έτσι ώστε να μπορούν πλασμιδιακό DNA αναδιάταξη του δίκλωνου διαμόρφωση στην φυσική κατάσταση, και τα βακτήρια χρωμοσωμικό DNA ελάχιστα ή καθόλου έτσι ακόμα να σε αναδίπλωση μετουσιωμένη κατάσταση, αυτά μετουσιωμένο χρωμοσωματικό DNA και μετουσιωμένη πρωτεΐνη συνυφασμένη εύκολα τοποθετείτε φυγοκέντρηση, και το πλασμίδιο DNA είναι ακόμη παρούσα στην υδατική φάση, ξηραίνεται πάνω από άνυδρο αιθανόλη Shen DNA πλασμιδίου Τέλος, μπορεί να ληφθεί με φυγοκέντρηση του πλασμιδιακού DNA. Παρασκευή του θραύσματος (δύο) DNA εισάγεται ένθετο DNA είναι ότι θέλουμε να μελετήσουμε τα γονίδια ή εφαρμογής, το οποίο πρόκειται να κλωνοποιηθεί ή εκφραζόμενα γονίδια. Λάβετε ένα ένθετο DNA είναι το πρώτο βήμα στη διαδικασία της μοριακής κλωνοποίησης. Υπάρχουν διάφορες μέθοδοι για άμεσο διαχωρισμό ενδονουκλεάση περιορισμού, διαλογής βιβλιοθήκης, στη μέθοδο vitro ενίσχυση, συνθετική μέθοδο, μετά πολυμεράσης αντίστροφης μεταγραφής αλυσιδωτής αντίδρασης -ϋΝΑ παράδειγμα για την εισαγωγή εξωγενών γονιδίων που λαμβάνονται μέθοδος ένθετο DNA.
