Γλώσσα :
SWEWE Μέλος :Σύνδεση |Εγγραφή
Αναζήτηση
Εγκυκλοπαίδεια της κοινότητας |Εγκυκλοπαίδεια Απαντήσεις |Υποβολή ερωτήματος |Λεξιλόγιο Γνώση |Ανεβάστε τη γνώση
Προηγούμενος 1 Επόμενος Επιλέξτε Σελίδες

Χρωματογραφία διηθήσεως πήγματος

Ορισμούς Τεχνολογία

Κινεζικό όνομα: Χρωματογραφία διήθησης

Αγγλική ονομασία: χρωματογραφία μοριακής διήθησης? GFC

Άλλες ονομασίες: χρωματογραφία πηκτής (χρωματογραφία πηκτής)? Χρωματογραφία μοριακού κόσκινου (χρωματογραφία μοριακών κόσκινων)? Χρωματογραφία διεισδύσεως γέλης (πήγμα διαπέρασης) χρωματογραφίαΟρισμός: GPC) "

Το ανωτέρω περιεχόμενο από το Εθνικό Επιστήμης και Τεχνολογίας Επιτροπή Έγκρισης ανακοίνωσε

Χρωματογραφία διήθησης πηκτής (χρωματογραφία διήθησης πηκτώματος) χρωματογραφία αποκλεισμού μεγέθους ή μοριακό κόσκινο μέθοδο, επίσης γνωστή μέθοδος βασίζεται κυρίως στο μέγεθος και το σχήμα της πρωτεΐνης, η ποιότητα της πρωτεΐνης να απομονωθεί και να καθαρισθεί. Στήλη του αδρανούς πληρωτικού στην πορώδη δομή ορισμένων ουσιών, ως επί το πλείστον διασταυρωμένες πολυσακχαρίτες (όπως δεξτράνη ή αγαρόζη) ουσίες, οι ουσίες στο μείγμα πρωτεΐνης με διαχωρισμό των διαφορετικών μοριακού μεγέθους. Επίσης κάλεσε χρωματογραφία μοριακού αποκλεισμού (μοριακού αποκλεισμού χρωματογραφία). Μία χρήση διάτρητων χάντρες γέλης ως υπόστρωμα, διαχωρίζεται σύμφωνα με το μοριακό μέγεθος πρωτεΐνες ή άλλα μόρια σε ένα μίγμα από χρωματογραφικές τεχνικές. Γενικώς ρεύσει έξω πρώτα μακρομόρια, τα μικρά μόρια ρέει έξω.

Θεμελιώδης

Επίσης γνωστή ως χρωματογραφία μοριακού ηθμού, χρωματογραφία διήθησης πηκτής, χρωματογραφία αποκλεισμού μεγέθους. Έχοντας μια δομή του δικτύου είναι η χρήση των μοριακών αποτελέσματος πήγματος κόσκινο, σύμφωνα με το μοριακό ουσίες διαχωρίζονται με τον διαχωρισμό των διαφορετικών μεγεθών. Στήλη του αδρανούς πληρωτικού στην πορώδη δομή ορισμένων ουσιών, ως επί το πλείστον διασταυρωμένες πολυσακχαρίτες (όπως δεξτράνη ή αγαρόζη) ουσίες, τα μικρά μόρια μπορούν να εισέλθουν στο εσωτερικό του, η απόσταση είναι μεγαλύτερη ροή, Τα μακρομόρια αποκλείστηκαν από έξω, κάτω από μια μικρή απόσταση, όταν ένα μικτό διάλυμα μέσω στήλης διήθησης πηκτής, το διάλυμα της ουσίας ανοίγεται με διαλογή με διαφορετικά μοριακά βάρη.

Πλεονέκτημα

Το πλεονέκτημά της είναι η χρήση χρωματογραφίας πηκτής σε ένα αδρανή φορέα είναι αφόρτιστο, προσρόφηση είναι αδύναμη, οι συνθήκες λειτουργίας είναι σχετικά ήπιες, σε σχετικώς ευρεία περιοχή θερμοκρασιών, χωρίς οργανικούς διαλύτες και τις φυσικές και χημικές ιδιότητες των διαχωρισμένων συστατικών να παραμείνει το μοναδικό. Του πολυμερούς υλικού έχει ένα καλό αποτέλεσμα διαχωρισμού.

Χρήση

⒈ γέλη επιλέγονται ανάλογα με το σκοπό του πειράματος διαφορετικές επιλογές για διαφορετικούς τύπους πηκτωμάτων. Εάν ο σκοπός του πειράματος είναι να μακρομόρια στο δείγμα και να διαχωριστούν μικρά μόρια, λόγω των συντελεστών διανομής τους σε μία σημαντική διαφορά, ο διαχωρισμός αυτός επίσης γνωστή ως ομάδες διαχωρισμού, και μπορεί να χρησιμοποιηθεί SephadexG-25 και G-50, τα μικρά πεπτίδια και χαμηλού μοριακού βάρους ουσίες (1000-5000) μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την αφαλάτωση SephadexG-10, G-15 και το Bio-Gel-ρ-2, ή 4, εάν ο σκοπός του πειράματος είναι να δοκιμάσουν μερικά από το μοριακό βάρος είναι μοιάζει περισσότερο με ένα διαχωρισμό ουσίας, όπως Διαχωρισμός ονομάζεται κλασματοποίηση. Ελαφρώς μεγαλύτερο από το όριο αποκλεισμού χρησιμοποιείται γενικά στις υψηλότερες μοριακού βάρους ουσίες στο πήκτωμα δείγματος, χρωματογραφικές διαδικασίες μπορούν να είναι διαφόρων βαθμών αυτών των ουσιών βαθιά στο εσωτερικό πηκτώματος, όπως Kd διαφορετικά, τέλος, να διαχωριστούν.

⒉ διάμετρο και το μήκος της στήλης σύμφωνα με την εμπειρία, ομάδες διαχωρισμού, χρησιμοποιούν ένα 2-μήκος 30cm στήλη, κλασμάτωση, γενικά απαιτεί περίπου 100 εκατοστά μακρά στήλη, 1-5 εκατοστών σε διάμετρο στο εύρος από λιγότερο από 1 εκατοστό παράγει αποτελέσματα τοίχο, μεγαλύτερη από 5 εκατοστά συνέχεια αραιώνεται σοβαρά. Μήκος L και διάμετρο D αναλογία L / D σε γενικές γραμμές θα πρέπει να είναι μεταξύ 7-10, αλλά η αργή κίνηση του υλικού θα πρέπει να είναι μεταξύ 30 και 40.

⒊ πηκτής παρασκευαστικής στήλης πήγματος μοντέλο έχει επιλεγεί, τα σωματίδια που αιωρούνται κόλλας σε απεσταγμένο νερό ή 5-10 φορές το ποσό του μέσου έκλουσης πλήρη διόγκωση, η διόγκωση των μικρών λεπτών τεμαχιδίων μετά ρίχνει έξω. Φυσικό διόγκωση περισσότερο χρόνο, η θερμότητα μπορεί να επιταχύνει την διόγκωση, δηλ. σε ένα λουτρό ζέοντος ύδατος για υγρή ιλύς πηκτώματος σταδιακά θερμαίνεται σχεδόν μέχρι βρασμού, 1-2 ώρες για να επιτευχθεί ένα επαρκές επέκταση διαλυμένο πήγμα. Θέρμανση μέθοδο, κερδίζοντας χρόνο και την απολύμανση.

Gel Loading: η κατακόρυφη στήλη στερεώνεται στο έδαφος σε ένα ράφι, το κάτω μέρος εξόδου με ένα κλιπ συσφίξεως πρωτεύουσες μπορεί να εγκαταστήσει ένα μεγάλο δοχείο εφοδιασμένο με αναδευτήρα, στήλη γεμάτη με υγρό έκλουσης GEL ένα σχετικά λεπτό πολτό του πρώτου γεμάτο περιέκτη υγρού στην κορυφή της στήλης, τότε το πήκτωμα αναδεύεται ελαφρώς βυθίζονται εντός της στήλης, έτσι ώστε το σωματίδιο επίπεδα άνοδος πήγματος, μέχρι το επιθυμητό ύψος, αφαιρέστε την κορυφή της συσκευής στήλης, με το κατάλληλο φίλτρο κομμάτι καλύπτουν ελαφρά την επιφάνεια της κλίνης γέλης. Ένα μικρό μέρος για κάποιο χρονικό διάστημα, και στη συνέχεια αρχίζει να ρέει ισορροπία, ταχύτητα ροής θα πρέπει να είναι χαμηλότερο από το ρυθμό ροής που απαιτείται για την χρωματογραφία. Αυξάνεται σταδιακά κατά τη διάρκεια της χρωματογραφίας ροή ισορροπίας, δεν υπερβαίνει την τελική ταχύτητα ροής. Εξισορρόπηση κρεβάτι gel διάρκεια της νύχτας πριν από τη χρήση για να ελέγξετε την χρωματογραφική κρεβάτι είναι ομοιόμορφη, αν οι "γραμμές" ή φυσαλίδες, ή να προσθέσετε λίγο χρώμα υλικό για να παρακολουθήσετε την κίνηση της κορδέλας, όπως μια στενή ζώνη, λεία ομοιόμορφη καλές επιδόσεις που περιγράφονται στήλη, κορδέλες εμφανίζονται παραμορφωμένες, διάσπαρτα, ευρύτερη στήλη πρέπει να εγκατασταθεί εκ νέου.

⒋ τζελ, φορτώνονται και εκλούεται μέσω της κλίνης ισορροπίας, αφήνοντας στην κορυφή της κλίνης του αριθμού της κλίνης πηκτής κορεσμένο ml εκλούσματος, και στη συνέχεια προσθέστε το σταγονόμετρο δείγματος. Γενικώς ο συνολικός όγκος του δείγματος δεν είναι μεγαλύτερος από τον όγκο κλίνης γέλης 5% -10%. Ανεξάρτητη της συγκέντρωσης του δείγματος και ο συντελεστής κατανομής, η συγκέντρωση του δείγματος μπορεί να αυξηθεί, αλλά το μεγαλύτερο μοριακού βάρους υλικό, το ιξώδες του διαλύματος αυξάνει με τη συγκέντρωση, η κίνηση μόριο είναι περιορισμένη, το σχετικό ιξώδες του δείγματος και έκλουσμα να μην υπερβαίνει το 1,5- (2) Μετά το άνοιγμα του δείγματος εξόδου ρεύματος προστίθεται, το δείγμα διεισδύσει το κρεβάτι gel, μόνο όταν η επιφάνεια του δείγματος με την επιφάνεια του στρώματος γέλης κανονικά, και στη συνέχεια προσθέστε μερικά ml ρέοντος πλύνετε το τείχος, καθιστώντας στο κρεβάτι gel μετά από όλα Το κρεβάτι χρωματογραφία με το έκλουσμα αποθήκευσης φιαλών και συλλέκτη που συνδέονται με προσχεδιασμένη ρυθμό ροής, και στη συνέχεια έκλουσμα τμήμα, και κάθε κλάσμα για τον ποιοτικό και ποσοτικό προσδιορισμό.

⒌ επαναχρησιμοποίηση στήλη gel, ανακύκλωση και τζελ συντήρησης μετά από μια γεμάτη στήλη μπορεί να χρησιμοποιηθεί κατ 'επανάληψη, χωρίς ειδική επεξεργασία, δεν επηρεάζει το αποτέλεσμα διαχωρισμού. Για την πρόληψη της μόλυνσης πηκτής, χρωματογραφία μπορεί να προστεθεί μετά την πρώτη αζίδιο του νατρίου 0,02%, πριν τις επόμενες παράγοντες βακτηριοστατική χρωματογραφίας θα πρέπει να αφαιρεθεί για να αποφευχθεί η παρεμβολή με τον προσδιορισμό του μέσου έκλουσης.

Μέθοδος ανάκτησης

Εάν δεν είναι πλέον η χρήση μπορεί να ανακυκλωθεί, η γενική προσέγγιση είναι να ξεπλύνετε το πήκτωμα αποστραγγίζεται, πλύθηκε με 70%, 90%, 95% αιθανόλη ισορροπίας αφυδάτωση σε περισσότερο από 90% αιθανόλη, στραγγίζεται, πλένεται με αιθέρα αιθανόλη, στραγγισμένο, ξηρό μέρος. Υγρή μέθοδος διατήρησης κατάσταση της ιλύος πηκτώματος προστέθηκε στο αντιμικροβιακό παράγοντα ή ένα ξέπλυμα νερού ουδέτερο σφραγισμένου αυτοκλείστου αποθηκευτεί.

Εφαρμογή της γέλης χρωματογραφίας

⑴ αφαλάτωση: πολυμερή (όπως πρωτεΐνες, νουκλεϊκά οξέα, πολυσακχαρίτες, κλπ.) το διάλυμα των χαμηλού μοριακού βάρους προσμίξεων μπορεί να απομακρυνθεί με χρωματογραφία γέλης, η λειτουργία αυτή ονομάζεται αφαλάτωσης. Αφαλάτωσης Νόμος είναι απλή, γρήγορη, και των ενζύμων και άλλων πρωτεϊνών κατά τη διαδικασία αφαλάτωσης δεν είναι εύκολο εκφυλισμό. Το gel εφαρμόζεται SephadexG-10, 15,25, ή Bio-Gel-ρ-2, 4,6. Μήκος της στήλης προς διάμετρο 5-15, όγκους κλίνης του όγκου του δείγματος μέχρι 25% -30% Για να αποφευχθεί η μείωση της διαλυτότητας αφαλατωμένο ίζημα πρωτεΐνης θα σχηματίσουν προσροφάται επί της στήλης, γενικώς πτητικά άλατα όπως ρυθμιστικό διάλυμα οξικού αμμωνίου για την εξισορρόπηση της στήλης και στη συνέχεια προστίθεται στο δείγμα, χρησιμοποιώντας το ίδιο ρυθμιστικό διάλυμα έκλουσης, το έκλουσμα συλλέχθηκε πτητικά άλατα απομακρύνθηκαν με λυοφιλίωση.

⑵ για Καθαρισμός: χρωματογραφία πηκτής έχει χρησιμοποιηθεί ευρέως ένζυμα, πρωτεΐνες, αμινοξέα, πολυσακχαρίτες, ορμόνες, αλκαλοειδή και άλλες ουσίες του διαχωρισμού και καθαρισμού. Πηκτής για να θερμάνει το αρχικό ισχυρή αιχμή απορρόφησης, μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την απομάκρυνση μη-ιοντικό νερό πυρετογόνο προετοιμασία του νερού για ένεση.

Προσδιορισμός του μοριακού βάρους του πολυμερούς υλικού ⑶: μια σειρά από πρότυπα γνωστού μοριακού βάρους στην ίδια στήλη πηκτής και χρωματογραφήθηκαν υπό τις ίδιες συνθήκες, ο όγκος το συστατικό εγγραφής όγκος έκλουσης ανά λεπτό, και έκλουση κατά μοριακό βάρος λογαριθμικό οικόπεδο, σε περιοχή μοριακού βάρους είναι μια ευθεία γραμμή, η οποία είναι το μοριακό πρότυπο καμπύλη βάρους. Προσδιορισμός του μοριακού βάρους της άγνωστης ουσίας, το δείγμα αυτό μπορεί να προστεθεί στην πρότυπη καμπύλη προσδιορίζεται πλύθηκε πρησμένο στήλης γέλης, ανάλογα με τον όγκο έκλουσης της ουσίας στην πρότυπη καμπύλη του μοριακού βάρους του.

⑷ συμπυκνωμένο διάλυμα πολυμερούς: συνήθως SephadexG-25 ή 50 μέσα στο αραιό διάλυμα συγκολλητικό πολυμερές, στη συνέχεια, το νερό και ουσίες χαμηλού μοριακού βάρους θα εισέλθουν στους πόρους του πηκτώματος στο εσωτερικό των σωματιδίων, το πολυμερές υλικό κατατάσσεται αντίσταση από ό, τι τα σωματίδια πηκτής, και στη συνέχεια με φυγοκέντρηση ή διήθηση, η διογκωμένη γέλη διαχωρίστηκε, το ληφθέν διάλυμα πολυμερούς συμπυκνώθηκε


Προηγούμενος 1 Επόμενος Επιλέξτε Σελίδες
Χρήστης Ανασκόπηση
Δεν υπάρχουν ακόμη σχόλια
Θέλω να σχολιάσω [Επισκέπτης (3.239.*.*) | Σύνδεση ]

Γλώσσα :
| Ελέγξτε τον κωδικό :


Αναζήτηση

版权申明 | 隐私权政策 | Πνευματική ιδιοκτησία @2018 Κόσμος εγκυκλοπαιδικές γνώσεις