Αρχή
EST (Ποσά Tag Sequence) εξέφρασε ετικέτες αλληλουχίας
EST επιλέγεται τυχαία από έναν κλώνο cDNA για 'άκρο και 3' το 5 άκρο του ενός αλληλουχίας για να ληφθεί μία μερική αλληλουχία cDNA της μικρής, αντιπροσωπεύουν ένα πλήρες γονιδίωμα ενός μικρού τμήματος του μήκους του σε μια βάση δεδομένων που γενικά κυμαίνεται από 20 έως 7000bp, Το μέσο μήκος 360 ± 120bp. EST από ορισμένες συνθήκες, η συνολικού mRNA ενός ιστού βιβλιοθήκης cDNA, έτσι EST μπορεί επίσης να εξηγήσει την οργάνωση της γονιδιακής έκφρασης.Τεχνολογία χάρτη πορείας
Πρώτον, το δείγμα εκχυλίζεται από το mRNA, υπό τη δράση της αντίστροφης μεταγραφάσης χρησιμοποιώντας ολιγο (άΤ) ως εκκινητής για RT-PCR σύνθεση του cDNA, και στη συνέχεια επιλέξτε το κατάλληλο φορέα βιβλιοθήκης cDNA δομήθηκε για κάθε στέλεχος αντιπαραβάλλει εισαγωγή κάθε ένα στέλεχος θέσεις κλωνοποίησης θραύσμα σύμφωνα με εκκινητές σχεδιάστηκαν φορέα αυτοματοποιημένη αλληλούχιση σε όλη την ώρα, η οποία είναι η διαδικασία της δημιουργίας αλληλουχιών EST.
Εφαρμογή
EST περιοχή ως έκφραση των γονιδίων που κωδικοποιούν DNA ετικέτα μόριο, λόγω της εξαιρετικά διατηρημένη αλληλουχία έχει το δικό του ιδιαίτερο χαρακτήρα της, καθώς και από μη εκφραζόμενων αλληλουχιών (όπως AFLP, RAPD, SSR, κλπ.) είναι πιο πιθανό από ό, τι μέσω της οικογένειας και το είδος των περιορισμών, EST δεικτών στη μακρινή συγγενή είδη συγκριτική γονιδιωματική και συγκριτική ποιοτική σύνδεση γνώρισμα πληροφορίες χάρτης είναι ιδιαίτερα χρήσιμη. Ομοίως, μία αλληλουχία DNA που στερείται τα είδη ζώων από άλλα είδη μπορούν επίσης να χρησιμοποιηθούν για τα είδη EST Γενετική χαρτογράφηση χρήσιμο, πληροφορίες επιτάχυνσης συναφών ειδών ταχεία μετατροπή. Συγκεκριμένα, EST ρόλο εκδηλώνεται με: ⑴ χρησιμοποιούνται για την κατασκευή γενετικών χαρτών και γονιδιώματος φυσική χάρτη? ⑵ ως ανιχνευτής για τα ραδιενεργά υβριδοποίηση? ⑶ για κλωνοποίηση θέσης? ⑷ προκειμένου να βρουν νέα γονίδια? ⑸ ως δείκτης μοριακού? ⑹ χρήση στη μελέτη των βιολογικών πολυμορφισμού πληθυσμών? ⑺ χρησιμοποιηθεί για τη μελέτη των λειτουργιών των γονιδίων? ⑻ ανάπτυξης φαρμάκων βοήθεια, βελτιωμένων ποικιλιών? ⑼ προώθηση άλλες πτυχές της ανάπτυξης των τσιπ γονιδίων. Είναι ακριβώς λόγω αυτών των EST έδειξε μεγάλες δυνατότητες, έχει αξιοποιηθεί πλήρως και την ανάπτυξη.
Μελέτη του ανθρώπινου γονιδιώματος, υπάρχει μια διαφορετική από το "ολόκληρη τη στρατηγική γονιδίωμα" "cDNA" στρατηγική, τόσο μέτρο μόνο μεταγραφεί αλληλουχία DNA του γονιδίου του προϊόντος μεταγραφής προσδιορίζεται αντίστροφη μεταγραφή του mRNA συμπληρωματικού DNA --- cDNA.cDNA Αντιπρόσωπος μια αλληλουχία γονιδίου που κωδικοποιεί την πρωτεΐνη. EST είναι ένα θραύσμα του cDNA, γενικά 200-400 νουκλεοτίδια μακρύ δεξιά. Ένα πλήρους μήκους cDNA μόριο μπορεί να έχει πολλές EST, αλλά μια δεδομένη EST αντιπροσωπεύουν μερικές φορές ένα ειδικό cDNA μόριο. Επικαλυπτόμενα αμφότερα τα άκρα της αλληλουχίας συναίνεσης EST μπορεί να συναρμολογηθεί σε ένα contig (contig), έως ότου το συγκρότημα είναι μία πλήρους μήκους αλληλουχία cDNA, αυτό θα ισοδυναμούσε με ένα κλωνοποιημένο γονίδιο που κωδικοποιεί αλληλουχία. Η EST τοποθετημένο στο γονιδίωμα, το γονιδίωμα μπορεί επίσης να απεικονίζονται ως μία αλληλουχία δείκτη.
|
